El Toxoplasma gondii es un parásito intracelular obligado, capaz de causar toxoplasmosis congénita, ocular y enfermedad grave en pacientes inmunocomprometidos. La PCR para Toxoplasma gondii permite la detección directa de su ADN en muestras clínicas, lo que es útil en fases agudas de la infección o cuando la respuesta serológica es insuficiente, proporcionando un diagnóstico temprano, específico y de alta sensibilidad.
Tipo de muestra/s biológicas:
Se utiliza principalmente líquido amniótico (especialmente para el diagnóstico prenatal), sangre (total, suero o plasma) o líquido cefalorraquídeo. También se utilizan muestras fetales y tejidos en infecciones congénitas o en pacientes inmunocomprometidos.
Extracción del ácido nucleico:
El ADN se extrae mediante kits comerciales basados en columnas de sílice
o perlas magnéticas, tanto en fluidos como en tejidos. En el caso de los tejidos,
incluidos los fijados o incluidos en parafina, se inicia con un proceso de
lisis (usualmente con la proteinasa K e incubación prolongada), seguido de
purificación mediante kits comerciales o métodos de precipitación.
Tipo de PCR y los genes amplificados:
En el ámbito clínico se emplean PCR convencionales y PCR anidadas (Nested PCR), principalmente con fines cualitativos, y de forma preferente PCR en tiempo real (qPCR), para detección y cuantificación. Los blancos moleculares más utilizados son el gen multicopia B1 (≈35 copias por genoma) y el elemento repetitivo de 529 pb (Rep-529 / AF146527), que presenta aproximadamente 200–300 copias. Debido a su mayor número de copias, Rep-529 suele ofrecer una mayor sensibilidad analítica y es la diana más utilizada en qPCR, aunque algunos protocolos emplean ambos blancos de forma combinada junto con controles internos.
Tipo de resultados cualitativos o cuantitativos:
Resultados cualitativos:
Resultados cuantitativos: La qPCR también permite obtener resultados cuantitativos, expresados como valores Ct (ciclo umbral) y, cuando se dispone de curvas estándar, estimación de carga parasitaria. Estos resultados son útiles en muestras como líquido amniótico, para evaluar la carga parasitaria, y para el seguimiento clínico. Los ensayos qPCR han demostrado amplios rangos lineales y límites de detección muy bajos, por lo que en la práctica clínica se utilizan tanto con fines confirmatorios (cualitativos) como para estimación y monitoreo de la carga parasitaria.
Video obtenido de: https://www.youtube.com/watch?v=iu4s3Hbc_bw
Referencias Bibliográficas:
1.
2.
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